汤丽娟等HPLC同时测定大腹皮中4种生物 [复制链接]

用HPLC检测生物碱含量时，发现在常规反相色谱柱上的保留较弱，不利于检测，因此，汤丽娟等人在对大腹皮中4种生物碱进行测定时提到一种色谱检测方法，用于解决此问题。

实验原理

离子交换色谱原理是指被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合，这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的，在改变pH或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时，离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同，其与离子交换剂的结合能力也不同，所以被洗脱到溶液中的顺序也不同，从而被分离出来。

实验方法

1、溶液的制备

1.1对照品溶液的制备精密称取氢溴酸槟榔碱19.98mg、盐酸槟榔次碱6.39mg、氢溴酸去甲槟榔碱4.49mg、盐酸去甲槟榔次碱6.50mg，加流动相溶解并定容至10mL量瓶中，制成对照品储备液，4℃冷藏备用。

1.2供试品溶液制备取大腹皮药材粉末（过5号筛）约0.5g，精密称定，精密加入乙腈-0.5%磷酸溶液（3070）25mL，置于mL锥形瓶中，称定重量，超声处理20min,用浓氨水调节pH为3-4，再用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，取上清液，00r/min离心5min，0.22μm微孔滤膜滤过，续滤液即为供试品溶液。

2.色谱条件

色谱柱：ThermoSCX(mm×4.6mm,5μm)；流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(浓氨试液调节pH值为3.3)=73:27，等度洗脱；柱温:30℃；检测波长:nm；流速:1.0mL/min；进样量:10μL。4种生物碱之间及与其他成分的分离度均大于1.5。理论塔板数均大于。HPLC图见图1。

图14种生物碱的HPLC图

Ａ.溶剂；Ｂ.对照品；Ｃ.大腹皮样品。

1.盐酸槟榔次碱；2.盐酸去甲槟榔次碱；3.氢溴酸槟榔碱；4.氢溴酸去甲槟榔碱。

3.方法学考察

3.1线性关系考察精密移取混合对照品储备液适量，用流动相稀释，分别制成7个浓度梯度的对照品溶液，按色谱条件下进样10μL，以峰面积积分值为纵坐标（Y），对照品进样量为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程。逐级稀释对照品溶液，以信噪比3作为检测限，以信噪比10作为定量限。结果见表1。

3.2精密度考察取同一浓度混合对照品溶液，按色谱条件下进样10μL，连续进样6次，记录各对照品峰面积，进行日内精密度考察；每天进样2次，连续3d，记录各对照品峰面积，进行日间精密度考察。氢溴酸槟榔碱、盐酸槟榔次碱、氢溴酸去甲槟榔碱、盐酸去甲槟榔次碱的日内精密度RSD分别为0.53%、0.74%、0.59%、0.74%，日间精密度RSD分别为0.66%、1.28%、0.97%、0.91%，精密度良好。

3.3重复性考察取6份大腹皮药材样品（广西），按上述方法制备，按色谱条件下进样10μL测定，记录各对照品峰面积，计算质量分数。氢溴酸槟榔碱、盐酸槟榔次碱、氢溴酸去甲槟榔碱、盐酸去甲槟榔次碱含量的RSD分别为0.12%、0.71%、0.57%、0.24%。

3.4稳定性考察取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24、48h按色谱条件下进样10μL，记录各对照品峰面积。48h内氢溴酸槟榔碱、盐酸槟榔次碱、氢溴酸去甲槟榔碱和盐酸去甲槟榔次碱的RSD分别为0.67%、0.30%、1.36%、0.82%。结果表明供试品溶液在48h内稳定。

3.5加样回收率考察取大腹皮药材样品（广西）9份，每份0.25g，精密称定，分别精密加入相当于其生物碱含量1.2、1.0、0.8倍的对照品，按方法制备，按色谱条件下进样10μL，计算加样回收率。氢溴酸槟榔碱、盐酸槟榔次碱、氢溴酸去甲槟榔碱和盐酸去甲槟榔次碱的加样回收率分别是96.9%、.0%、.8%、.3%，RSD分别为1.82%、1.45%、1.75%、1.12%。

4.样品含量测定

取12批样品，按制备方法制备供试品溶液，按色谱条件下进样10μL测定，结果见表2。

点评：

此方法准确性高、重复性好。可用于大腹皮中4种生物碱含量测定，可作为大腹皮及其制剂多指标质量评价和控制体系的参考依据。

此色谱条件可以解决生物碱类化合物保留较弱的问题，为生物碱成分色谱分析提供了一个有效方法。

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参考文献：汤丽娟,吴皓,郁红礼.HPLC同时测定大腹皮中4种生物碱含量[J].中华中医药杂志(原中国医药学报),,29(11):-.